中國醫學科學院北京協和醫學院放射醫學研究所我司明膠酶譜試劑盒發表文章啦
標題《組織基質金屬蛋白酶抑制劑-2的表達純化及活性鑒定》
摘要：組織基質金屬蛋白酶抑制劑-2 (TIMP-2)抑制腫瘤遷移及侵襲。文中以人TIMP-2為研究對象，探索人TIMP-2蛋白的原核表達特征，并進行純化及活性鑒定。以人肺癌A549細胞的總RNA反轉錄得到的cDNA為模板，克隆人TIMP-2基因，構建pET28a重組表達載體；經酶切檢測和測序分析的重組表達載體pET28a-TIMP-2轉入大腸桿菌Escherichia coli BL21(DE3)中，利用異丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)誘導表達，并對表達條件進行優化。經鎳親和柱純化后，用Western blotting法鑒定融合蛋白His-TIMP-2，并用明膠酶譜法檢測融合蛋白的活性。研究發現融合蛋白His-TIMP-2在E. coli BL21(DE3)中以包涵體的形式存在；在一定范圍內，IPTG濃度對His-TIMP-2的表達量沒有顯著影響；而在該表達系統中，誘導溫度和時間是關鍵參數，His-TIMP-2的表達量隨誘導溫度升高而增加；純化并復性后的融合蛋白His-TIMP-2能有效抑制人肺癌A549細胞表達的基質金屬蛋白酶的活性。具有活性的融合蛋白的獲得為后續深入研究人TIMP-2的功能及機制奠定基礎，并對腫瘤治療具有重要意義。
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