卵磷脂膽固醇酰基轉(zhuǎn)移酶(LCAT)ELISA試劑盒基本信息
LCAT由肝臟合成，在血漿發(fā)揮酶作用。它催化HDL中的卵磷脂-2-脂肪酸轉(zhuǎn)移到FC，生成CE和溶血磷脂。血在以上Apo的作用下，LCAT可對FC和CE作雙向調(diào)節(jié)。LCAT選擇性底物為HDL，對VLDL和LDL幾乎不起作用。遺傳性和繼發(fā)性LCAT缺陷、酒精中毒性肝炎時，出現(xiàn)HDL代謝異常。
卵磷脂膽固醇酰基轉(zhuǎn)移酶(LCAT)ELISA試劑盒檢測技術簡介
雙抗體夾心法
1. 包被：用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10μg/ml。在每個聚苯乙烯板的反應孔中加0.1ml，4℃ 過夜。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘。（簡稱洗滌，下同）。
2. 加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應孔中，置37℃ 孵育1小時。然后洗滌。（同時做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔）。
3. 加酶標抗體：于各反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標抗體（經(jīng)滴定后的稀釋度）0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小時，洗滌。
4. 加底物液顯色：于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。
5. 終止反應：于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml。
6. 結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強，陰性反應為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號表示。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。
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