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GST-瓊脂糖凝膠4B預裝柱使用說明

相關介紹：

GST-瓊脂糖凝膠4B是一種將谷胱-甘肽鍵合在瓊脂糖凝膠微球上形成的生物親和層析分離介質，主要用于谷胱-甘肽轉移酶標記蛋白（GST融合蛋白）、谷胱-甘肽轉移酶和谷胱-甘肽依賴蛋白的分離純化，通過一步親和層析，就能獲得高純度的蛋白。與GST-瓊脂糖凝膠FF相比，GST-瓊脂糖凝膠4B能獲得更高的載量。

品  名：GST-瓊脂糖凝膠4B

英文名：Glutathione NUPharose 4B

規  格：20 ml，100 ml

運  輸：2 ~ 30℃，常壓、避光

貯  存：20%乙醇，2~8℃

使用方法：

1. 裝柱

1.1 根據分離目標性質配制初始緩沖液（平衡液）和洗脫緩沖液。

1.2 將凝膠抽干，并用蒸餾水洗滌2次去除保存的乙醇，用蒸餾水配成勻漿并脫氣。

1.3 將層析柱垂直固定，底端用水或緩沖液潤濕并保持一段液位。

1.4 用玻璃棒引導勻漿沿著柱內壁一次性倒入柱內，使凝膠在柱內自由沉降。

1.5 連結好柱子頂端活動柱頭，打開蠕動泵，讓緩沖液用使用時操作流速流過5柱體積，再使用1.5倍的操作流速流過5柱體積，調節適配柱頭，使其盡量貼近膠面，后用2-3倍柱體積的緩沖液平衡柱子。

注意：（1）操作過程不能引入氣泡，裝膠的均勻度。（3）如無條件做1.2，填料層有氣泡，可進行2次裝柱，去除保存的乙醇和氣泡。（4）乙醇等試劑配制的溶液需要脫氣。

2. 平衡

將平衡緩沖液以操作流速平衡層析柱，觀察檢測器的變化，直到電導、pH等參數不變。推薦的結合平衡緩沖液為：10mM PBS (140mM NaCl, 2.7mM KCl, 10mM Na2HPO4, 1.8mM KH2PO4, pH 7.4)。

3. 上樣

切換轉換閥進行上樣，上樣量根據樣品的性質和層析介質的量進行選擇，也可進行線性實驗找到佳上樣量；樣品的預處理：置換緩沖液，澄清過濾（0.45、0.22μm）等。

4. 沖洗

用2-3個柱體積的平衡緩沖液沖洗上樣后的層析柱，觀察檢測器的變化，直到電導、pH等參數不變，此時未交換的組分被清洗出去。

5. 洗脫

一般推薦用10mM還原型谷胱-甘肽溶液（可含緩沖成分）進行洗脫。推薦的洗脫緩沖液為：50mM Tris-HCl, 10 mM 還原型谷胱-甘肽(GSH), pH 8.0。

6. 再生

用蒸餾水按操作流速沖洗3-5個柱體積，接著用平衡液洗到平衡3-5個柱體積。

若有失活蛋白質或脂類物質在再生時洗不掉，可用在位清洗（CIP）除去。

7. 在位清洗(CIP)

去除沉淀和變性蛋白：用2CV 6M鹽酸胍清洗，立即用10mM PBS(pH7.4)洗5CV。

去除強疏水蛋白：用3-4CV 70%乙醇清洗，立即用10mM PBS(pH7.4)洗5CV。